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藥敏試驗 |
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3.1.3 將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。 3.2 牛津杯法 3.2.1 在“超淨台”中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌塗佈到平皿培養基上。具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌，以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密佈於平皿。 （另：可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗佈於平皿培養基表面。要求塗佈均勻緻密。） 3.2.2 以無菌操作將滅菌的不袗小管（內徑6nm、外徑8nm、高10nm的圓形小管，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養基上，輕輕加壓，使其與培養基接觸無空隙，並在小管處標記各種藥物名稱。每個平板可放4-6支小管。待分鐘後，分別向各小管中滴加一定數量的各種藥液，勿使其外溢。置37℃培養8-18小時，觀察結果。3.2.3 將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。 3.3 打孔法： 該法較簡單，成本低，易操作，比較適用於商品藥物的檢測。 3.3.1 在“超淨台”中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌塗佈到平皿培養基上。具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌，以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密佈於平皿。 （另：可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗佈於平皿培養基表面。要求塗佈均勻緻密。） 3.3.2 以無菌操作將滅菌的不袗小管（外徑為4毫米、孔徑與孔距均為3毫米，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養基上打孔，將孔中的培養基用針頭挑出，並以火焰封底，使培養基能充分的與平皿融合（以防藥液滲漏，影響結果）。 3.3.3 加樣：按不同藥液加樣，樣品加至滿而不溢為止。 3.3.4 將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。 結果觀察 在塗有細菌的瓊脂平板上，抗菌藥物在瓊脂內向四周擴散，其濃度呈梯度遞減，因此在紙片周圍一定距離內的細菌生長受到抑制。過夜培養後形成一個抑菌圈，抑菌圈越大，說明該菌對此藥敏感性越大，反之越小，若無抑菌圈，則說明該菌對此藥具有耐藥性。其直徑大小與藥物濃度、劃線細菌濃度有直接關係。 判定標準 一、藥敏實驗的結果，應按抑菌圈直徑大小作為判定敏感度高低的標準。 表1 藥物敏感實驗判定標準 抑菌圈直徑（毫米） 敏感度 20以上 極敏 15~20 高敏 10~14 中敏 10以下 低敏 0 不敏 具體對於不同的菌株，及不同的抗生素紙片需參照NCCLs的標准或者CLSI標準。 二、藥物敏感實驗判定標準參考表1，多黏菌素抑菌圈；在9毫米以上為高敏，6—9毫米為低敏，無抑菌圈為不敏。 |
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